2014年3月至4月在湖北省肉牛場(chǎng)發(fā)生牛腹瀉。無菌采集腹瀉進(jìn)行細(xì)菌分離，涂片，染色和顯微鏡檢查，及其形態(tài)特征，培養(yǎng)特性，生化特性和致病性。 研究性別等生物學(xué)特征，接下來小編簡(jiǎn)單介紹一篇獸醫(yī)論文。

　　大腸埃希氏菌(E. coli)通常稱為大腸桿菌，由Escherich于1885年首次在動(dòng)物的腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)[1]。在大腸桿菌中，大多數(shù)是不致病的腸道常在菌，少數(shù)具有致病性。大腸桿菌病又稱大腸桿菌性腹瀉，是由致病性大腸桿菌引起的一種急性傳染病。自從1894年大腸桿菌病首次在瑞典、荷蘭、法國(guó)等養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)國(guó)家暴發(fā)以來，給世界畜牧業(yè)造成了巨大損失[2]。該病的主要特征為敗血癥和嚴(yán)重腹瀉、脫水，引起幼畜大量死亡或發(fā)育不良。隨著我國(guó)畜牧業(yè)規(guī)模化、集約化飼養(yǎng)模式的發(fā)展，該病的發(fā)病率和死亡率逐年增加。

　　2014年3～4月間，湖北省某規(guī)模化肉牛場(chǎng)發(fā)生了以高熱，食欲廢絕，排水樣、糊狀或褐色糞便，少數(shù)排血樣糞便，最終消瘦乃至死亡等癥狀的傳染性疾病，全場(chǎng)發(fā)病率達(dá)30%，犢牛發(fā)病率高達(dá)76%，死亡率達(dá)5%。

　　為了弄清本次發(fā)病的主要病因，無菌采集病牛腹瀉物，從中分離出致病性大腸桿菌，并對(duì)分離獲得的菌株進(jìn)行了生物學(xué)特性研究。

　　1 材料與方法

　　1.1 病料

　　病牛腹瀉物。無菌采集，采樣人帶一次性無菌手套直腸采集，保證一頭牛一個(gè)手套，防止交叉污染。

　　1.2 培養(yǎng)基的制備

　　1.2.1 普通瓊脂培養(yǎng)基 量取牛肉湯500 mL，加入5 g蛋白胨、2.5 g氯化鈉，放蒸汽鍋內(nèi)加溫30 min，調(diào)整pH為7.2～7.4，再置蒸汽鍋內(nèi)加熱30 min，用濾紙過濾。加入15 g的瓊脂，置蒸汽鍋內(nèi)加熱至完全溶解。分裝于錐形瓶中，置高壓蒸汽鍋內(nèi)， 121 ℃滅菌20 min。待冷卻至50 ℃左右時(shí)倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，完全冷卻后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.2 血液瓊脂培養(yǎng)基 取上述經(jīng)滅菌后的普通瓊脂冷至50 ℃左右的普通瓊脂100 mL，無菌加入家兔脫纖維血液15 mL，混勻后倒入滅菌的培養(yǎng)皿中，完全冷卻后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.3 伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基 取上述經(jīng)滅菌后的普通瓊脂100 mL溶解滅菌，并冷卻至60 ℃左右，分別加入滅菌的20%乳糖溶液2 mL、2%伊紅水溶液2 mL及5%美藍(lán)水溶液1 mL，混勻后傾入滅菌平皿中，完全冷卻后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.4 SS瓊脂 牛肉膏2.5 g、蛋白胨2.5 g、瓊脂9 g加入500 mL蒸餾水中，加熱溶解。再加入膽鹽4 g、乳糖5 g、枸櫞酸鈉6 g、硫代硫酸鈉6 g及枸櫞酸鐵0.25 g，微熱加溫使其全部溶解，調(diào)整pH為7.2。混勻后傾入滅菌平皿中，完全冷卻后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.5 麥康凱培養(yǎng)基 取蛋白胨2.0 g、氯化鈉0.5 g、乳糖1.0 g、膽鹽0.5 g和100 mL蒸餾水，調(diào)整pH為7.4，加入2.5g瓊脂，分裝于錐形瓶中，121 ℃滅菌15 min，待冷至50 ℃左右時(shí)，加入滅菌的1%中性紅水溶液0.5 mL，搖勻后傾入培養(yǎng)皿，完全冷卻后4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

　　1.2.6三糖鐵培養(yǎng)基 取適量三糖鐵瓊脂粉，加入100 mL蒸餾水，加熱溶解，115 ℃高壓蒸汽滅菌20 min，待冷至50 ℃左右時(shí)分裝試管，使成底層較深的斜面。

　　1.3 試劑

　　微量生化鑒定管為杭州微生物試劑有限公司產(chǎn)品，購(gòu)自武漢市某商業(yè)公司。

　　1.4 試驗(yàn)動(dòng)物

　　8～10 g SPF昆明鼠，購(gòu)自湖北省疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

　　1.5 細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定

　　采用需氧和厭氧(缸內(nèi)燃燭法)兩種方法，利用普通瓊脂培養(yǎng)基從病料中分離細(xì)菌。對(duì)不同形態(tài)的菌落進(jìn)行涂片、染色、鏡檢和純培養(yǎng)。將純培養(yǎng)菌接種于5%血液營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、三糖鐵培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)菌培養(yǎng)特性。

　　1.6 分離菌生化試驗(yàn)

　　取生長(zhǎng)良好的紅色菌落接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng) 24 h，按常規(guī)方法進(jìn)行生化試驗(yàn)，主要包括葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、蔗糖的發(fā)酵試驗(yàn)，硫化氫、丙二酸鹽利用、枸櫞酸鹽利用、鳥氨酸鹽脫羧酶、賴氨酸脫羧酶、葡萄糖磷酸鹽、衛(wèi)茅醇試驗(yàn)等。

　　1.7 動(dòng)物試驗(yàn)

　　將細(xì)菌純培養(yǎng)物接種于普通肉湯中培養(yǎng)24h，分別以口腔和腹腔途徑各接種5只SPF昆明小鼠，每只接種0.2 mL(約含108 CFU/mL)菌液，另取2只作為對(duì)照，隔離飼養(yǎng)觀察。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 分離菌的形態(tài)

　　自患牛腹瀉物中分離獲得純化菌株1株。該分離菌為兼性厭氧菌，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上就可以生長(zhǎng)，顯微鏡下可以見到菌體短小，兩端鈍圓、著色較深， 無芽孢，多呈單個(gè)排列， 個(gè)別形成短鏈狀排列，革蘭氏染色陰性(圖1)。

　　閱讀期刊：中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)

　　《中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)》是由農(nóng)業(yè)部主管、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所主辦的獸醫(yī)專業(yè)學(xué)術(shù)性期刊。繼1999年獲首屆國(guó)家期刊獎(jiǎng)、2003年獲第二屆國(guó)家期刊獎(jiǎng)百種重點(diǎn)期刊獎(jiǎng)之后，2005年又榮獲第三屆國(guó)家期刊獎(jiǎng)提名獎(jiǎng)。