《糧食科技與經(jīng)濟(jì)》雜志是全國唯一融自然、社會科學(xué)為一體的綜合刊物。創(chuàng)刊于 1976 年，是中國糧油學(xué)會會刊，國家糧食局標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量中心支持期刊。 由原全國米糠油科技情報中心等單位主辦的《糠油科技》經(jīng)《糧油科技》等更名為《糧食科技與經(jīng)濟(jì)》，多年來一直由袁隆平院士和王瑞元研究員等著名專家擔(dān)任顧問，是中國學(xué)術(shù)期刊綜合評價數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計源期刊、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫全文收錄期刊、中國核心期刊(遴選)數(shù)據(jù)庫收錄期刊、中文科技期刊數(shù)據(jù)庫收錄期刊、臺灣華藝 CEPS 中文電子期刊。

　　摘要：在實(shí)驗室條件下，采用菌絲生長速率法測定了13種殺菌劑對發(fā)生在湖北的草莓膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的生物活性。結(jié)果表明，供試殺菌劑對草莓炭疽病菌菌絲抑制作用存在明顯差異，對草莓膠孢炭疽病病菌毒力最強(qiáng)的是好立克、丙環(huán)·咪鮮胺和施保功，其EC50值分別為0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L，福星、施保克、百泰、世高、凱特、溴菌腈和凱潤的EC50值均相對很低，這10種殺菌劑均可作為防治草莓膠孢炭疽病的首選殺菌劑;腈菌唑、翠貝和二氰蒽醌的抑制活性較差，EC50值分別為12.12、17.58和106.99 mg/L。

　　關(guān)鍵詞：草莓炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides),毒力測定,殺菌劑,篩選,核心論文發(fā)表

　　草莓(Fragaria ananassa Duchesne)有“果中皇后”之稱，營養(yǎng)豐富，經(jīng)濟(jì)價值很高。自1931年首次報道草莓炭疽病以來，已有多國報道該病的發(fā)生，其廣泛的傳播性和潛在危害已被廣泛關(guān)注[1]。高溫濕潤的氣候條件適宜該病發(fā)生。因此，其對7～8月份草莓生產(chǎn)苗繁育造成的損失尤為嚴(yán)重。我國于1997年由葉正文等首次發(fā)現(xiàn)草莓炭疽病，湖北省該病發(fā)生越來越重，嚴(yán)重阻礙了草莓產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，尤其是在高溫多濕的育苗季節(jié)更為嚴(yán)重。目前對該病害的研究主要有葉正文等對抗病品種篩選、龍軍等[3-9]對該病原菌生物學(xué)特性的研究等，針對防治該病害的農(nóng)藥篩選研究很少。作者力求篩選出對草莓膠孢炭疽病病菌毒力大、抑菌效果好的殺菌劑供生產(chǎn)上使用。因此試驗選用13種殺菌劑作為供試藥劑，采用菌絲體生長速率法對草莓膠孢炭疽病病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，以期篩選出對草莓膠孢炭疽病病菌毒力強(qiáng)的殺菌劑，為防治草莓炭疽病提供參考。

　　1 材料與方法

　　1.1 供試菌株

　　草莓炭疽病病原菌來源于湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所分離，并通過分子鑒定保存的炭疽病病原膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc][10]，經(jīng)過單孢純化后獲得供試菌株。

　　1.2 供試藥劑

　　經(jīng)預(yù)備試驗篩選出以下幾種藥劑做藥效測定(表1)。

　　1.3 殺菌劑室內(nèi)毒力測定

　　采用殺菌劑室內(nèi)生長速率法測定[10]。上述藥劑均用無菌水配制成系列濃度梯度的溶液，在無菌操作臺上將不同梯度的藥劑加入到滅過菌的冷卻到40～50 ℃的PDA培養(yǎng)基中，傾入后立即水平方向平穩(wěn)搖動三角瓶，使藥劑在培養(yǎng)基中均勻分布后倒平板。在每個平板中央接入一塊直徑為0.5 cm的菌苔，以不加藥劑為空白對照。25 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)6 d后用“垂直十字交叉法”測量菌落直徑，檢查藥劑的抑菌效果，每處理5皿，重復(fù)3次。

　　將PDA培養(yǎng)基放入121 ℃高壓滅菌20 min。按每個三角瓶分裝60 mL。分裝后放在無菌操作臺上，用移液槍移入被稀釋后的不同濃度的農(nóng)藥，并搖勻。然后快速將其分別倒入3個培養(yǎng)皿中。每個培養(yǎng)皿倒入20 mL，待其冷卻凝固后在培養(yǎng)皿左上方貼標(biāo)簽紙標(biāo)記(預(yù)備做農(nóng)藥抑菌試驗的農(nóng)藥的編號)，然后用打孔器將供實(shí)驗菌打孔，移入培養(yǎng)皿內(nèi)。然后將培養(yǎng)皿倒置于培養(yǎng)箱中，25 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)6 d，觀察并測定抑菌圈直徑。檢查藥劑的抑菌效果，每處理3皿，重復(fù)3次。通過十字交叉法對抑菌圈的大小進(jìn)行測定。

　　抑菌率=■×100%

　　將藥劑對菌絲的抑制率轉(zhuǎn)換成幾率值(y)，藥劑各濃度(mg/L)轉(zhuǎn)換成對數(shù)值(x)，進(jìn)行線性回歸分析，求出毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)，最后計算出各藥劑對病菌菌絲生長的抑制中濃度(EC50)。

　　1.4 數(shù)據(jù)分析

　　試驗數(shù)據(jù)的分析均用SPSS 11.5和Excel 2003完成。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 殺菌劑對病原菌EC50的比較

　　不同藥劑對炭疽病病原菌菌絲生長的抑制中濃度(EC50)見表2。從表2中可以看出，13種藥劑對炭疽病病原菌菌絲的生長速度具有不同程度的抑制作用，抑制效果表現(xiàn)出明顯的差異。

　　從各藥劑的毒力回歸方程和EC50可以看出，13種藥劑中好力克、丙環(huán)·咪鮮胺和施保功3種殺菌劑對病菌的毒力作用最強(qiáng)，EC50值分別為0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L;其次是福星，EC50為0.17 mg/L;施保克EC50為1.11 mg/L，百泰EC50為1.23 mg/L，凱特EC50為1.57 mg/L，世高EC50為1.83 mg/L，凱潤EC50為4.22 mg/L，溴菌腈EC50為4.42 mg/L，相對較低;而腈菌唑、翠貝和二氰蒽醌對病菌的抑制作用差，其中二氰蒽醌的抑制作用最差，EC50值達(dá)到106.99 mg/L。

　　2.2 病原菌對殺菌劑的敏感性比較

　　回歸方程的斜率越大，表明病菌對該殺菌劑的敏感性越差。殺菌劑按照斜率值(表2)從大到小排序依次為二氰蒽醌、腈菌唑、溴菌清、施保克、翠貝、凱潤、凱特、世高、百泰、福星、施保功、好立克和丙環(huán)·咪鮮胺，說明病菌對施保功、好立克和丙環(huán)·咪鮮胺最敏感。

　　3 討論

　　通過分析各藥劑的毒力回歸方程斜率值與其EC50值，綜合分析認(rèn)為溴菌清、施保克、凱潤、凱特、世高、百泰、福星、施保功、好立克、丙環(huán)·咪鮮胺10種藥劑的抑菌效果較好。其中施保克對病菌的EC50值較低，且斜率值較高，成為最具潛力的使用藥劑。其他藥劑也具有很好的應(yīng)用價值，在生產(chǎn)上可以輪換使用，防止病菌產(chǎn)生耐藥性。

　　篩選出的10種殺菌劑有著不同的作用方式，其中施保克為咪唑類殺菌劑，主要作用方式是抑制甾醇類生物合成，雖然不具有內(nèi)吸作用，但具有一定的傳導(dǎo)性能。苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、氟硅唑、戊唑醇屬于三唑類殺菌劑，其作用機(jī)理為影響甾醇類生物合成，使菌體細(xì)胞膜功能受到破壞，具有內(nèi)吸性。吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，來源于天然抗生素，為線粒體呼吸抑制劑，不僅具有廣譜的生物活性，更具有高度的選擇性，對環(huán)境安全。室內(nèi)藥劑篩選的結(jié)果雖可以看出藥劑對菌絲具有抑制作用，但由于受很多因素的影響，培養(yǎng)皿內(nèi)的抑菌活性和在田間使用上的作用效果不一定完全一致，因此還有待作進(jìn)一步田間的防治效果試驗。